CRISPR/Cas9基因敲除技術(shù)服務(wù) 服務(wù)編號：SV1501

一. CRISPR/Cas9技術(shù)介紹

      CRISPR/Cas9 是一種基于細(xì)菌天然免疫機制開發(fā)出的基因編輯技術(shù)，用于抵御病毒等外來物入侵的一種防御機制。經(jīng)改造的CRISPR系統(tǒng)主要由Cas9蛋白和單鏈向?qū)NA（sgRNA）組成，其中sgRNA對靶序列進行特異性識別，Cas9蛋白負(fù)責(zé)對識別的靶序列進行切割，從而實現(xiàn)DNA的雙鏈斷裂。

      DNA雙鏈斷裂后，細(xì)胞對DNA的損傷修復(fù)機制就會被激活。目前主要由兩種修復(fù)機制，非同源末端連接（NHEJ）修復(fù)和同源重組介導(dǎo)的修復(fù)（HDR）。沒有外源模板時，機體主要進行NHEJ修復(fù)。NHEJ修復(fù)過程中，會在切割位點隨機的進行缺失或插入堿基序列，導(dǎo)致DNA移碼突變，從而使基因不能正常表達(dá)。存在外源模板的情況下，機體會啟動HDR修復(fù)來實現(xiàn)基因的精準(zhǔn)插入或者替換。

二．服務(wù)內(nèi)容與流程

服務(wù)內(nèi)容：

Tip: 請您填寫項目申請表，以便Bioss為您提供更好的技術(shù)服務(wù)。

服務(wù)流程：

1. 客戶提供需要敲除的指標(biāo)信息，與公司商定具體的制備項目、數(shù)量和費用，雙方簽訂《委托CRISPR/Cas9基因敲除服務(wù)合同》。

2. 雙方確定合作細(xì)節(jié)，實驗過程中及時反饋實驗進程，并按照規(guī)定時間完成委托服務(wù)。并向客戶提供委托產(chǎn)品與實驗報告。

三．技術(shù)流程

1.RNP轉(zhuǎn)染法

2.質(zhì)粒轉(zhuǎn)染法

四．案例結(jié)果展示

五．服務(wù)優(yōu)勢

1. 兩種敲除方法（質(zhì)粒法和RNP法）可供客戶選擇。

2. 每個靶標(biāo)設(shè)計多條sgRNA，提供多種敲除策略，最大限度的提高的KO效率，提高蛋白水平的敲除概率。

3. 通過Sanger測序后，多種軟件分析編輯效率，提高編輯結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 不同的細(xì)胞系具有專屬的轉(zhuǎn)染方案，提高靶標(biāo)編輯的效率。